APS-AA氨基酸专用柱

APS-AA氨基酸专用柱

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色谱柱信息 氨基酸专用柱 APS-AA (氨基酸分析)色谱柱专为分离与分析游离氨基酸而设计。该柱以硅胶基质反相固定相材料为填料。APS-AA 固定相以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质

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色谱柱信息

氨基酸专用柱 APS-AA (氨基酸分析)色谱柱专为分离与分析游离氨基酸而设计。该柱以硅胶基质反相固定相材料为填料。APS-AA 固定相以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质,采用高纯度键合试剂,通过创新独有的技术确保单分子层覆盖和全封尾。 高度可控的单分子层形成和封尾技术保证了可靠的柱间重现性。APS-AA 表面覆盖率,因此具有优异的稳定性。该填料为均一的球形颗粒,孔径为 120 Å,比表面积为 300 m 2 /g。 通过运用独有的匀浆填装技术装填得到的 APS-AA 柱柱床密度均一稳定,因此可保证具有柱效。通过 PITC 衍生化方法, 18 种氨基酸可在 APS-AA 柱获得高分辨率的快速分析。

安全注意事项

氨基酸专用柱通常在高压下运行,如果管路连接不紧,将会导致有机溶剂和注入样品的泄漏,从而对操作人员的健康产生影响。一旦发生泄漏,应佩戴适当的手套进行处理。另外当打开色谱柱时还应采取适当的保护措施,以防止微小的硅胶颗粒进入呼吸道。

色谱柱安装与操作

色谱柱在运输过程中或在没有使用时,它的两端总是用堵头进行密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时,首先移去两端的堵头。请注意将流动相流动的方向与柱上标记的方向保持一致。除非出于特殊考虑,例如为了清除堵在色谱柱入口端的脏污等而需要将色谱柱反接以进行冲洗时,建议用户在接上色谱柱时一定要遵循柱上标记的方向。由于色谱柱的连接是整个色谱操作过程的一部分,如果密封卡套过紧,或安装不合适,或者密封卡套与色谱柱端口不匹配,都有可能导致溶液的泄漏。请按照下面步骤将色谱柱与密封卡套相连接,从而将色谱柱接入 HPLC 系统中:
(a)第一次使用的管线,请依次将管线接头和密封卡套装在外径 1/16”的管线上。密封卡套的宽口端应朝向管线接头。
(b)将管线紧紧插入色谱柱的接口,向前滑动密封卡套和管线接头,并使管线接头的螺纹与色谱柱端口的螺纹相互衔接,然后拧紧管线接头。如果管线为高分子材料,请转到步骤(d);如果是金属管线,请继续(c)。
(c)在用力将管线压入柱端接口之后,用 1/4”扳手将已拧紧的螺帽再进一步紧固。
(d)对色谱柱的另一端采用上述方法进行操作。新的 APS-AA 柱中的液相是乙腈与水的混
合溶液。在储存和运输过程中,硅胶填料可能会干涸。这时推荐用 5~10 倍柱体积的纯有机溶剂如甲醇、乙腈进行冲洗以活化色谱柱。接着可用用户自己选择的流动相冲洗色谱柱。流速由 0.1 mL/min逐渐升至所需的操作条件,直至基线稳定为止。如果柱压和基线波动较大,这可能是气泡进入了色谱柱中。这时可用较高流速冲洗色谱柱 2~5 min。样品与流动相为了避免色谱柱的堵塞,所有样品和溶剂,包括缓冲溶液在内,都必须在使用前用 0.45 μm 或0.2 μm 的滤膜过滤。APS-AA 键合固定相的性质为非极性,推荐流动相为有机试剂与水的混合物(如甲醇或乙腈的水溶液等)。流动相在使用前需要脱气。一个简单的脱气方法是将流动相在由水泵形成的真空下超声 5 min。当 APS-AA 柱用于梯度洗脱时,起始流动相通常为 5 %甲醇(或乙腈)。

色谱柱的保养

pH 避免在 pH 低于 2 或高于 8 的条件下使用色谱柱。较高的 pH 会溶解硅胶,从而使部分或全部的键合相从硅胶表面脱落,引起分离效率的降低和保留时间的改变。为了获得分离效果和延长柱的使用寿命,请尽量使用 pH 在 3~7.5 范围内的流动相。

压力

尽管氨基酸专用柱可在高至4000 psi的压力下使用,但正常的操作压力应当低于2500 psi。长时间在高压下运行会损坏色谱柱和输液泵。由于压力来源于流速,因此流速将受制于系统所能承受的压力。一般而言,柱压会随着色谱柱使用时间的增加而逐渐增加。压力突然增加预示色谱柱入口端的筛板发生了堵塞。在这种情况下,建议将色谱柱反接后用适宜的溶剂进行冲洗。

温度

温度为 60°C。长时间在高温(>75°C)下操作也会损坏色谱柱,这种情形在高的 pH(>8.5)条件下特别突出。

色谱柱清洗

多次使用后某些样品中的杂质可能会吸附到入口筛板或填料上。当积累到一定程度时会出现压力升高并伴随峰形展宽的现象。出现这种情况时,推荐用5~80 %乙腈水溶液低流速梯度冲洗色谱柱5~10倍柱体积,结束后保存于乙腈与水的混合溶液中。

储藏

长期不用时,请不要让水或缓冲液存留在色谱柱中。在替代缓冲液时,请用至少 20~30 倍柱体积的 50 %甲醇(或乙腈)水溶液冲洗色谱柱,再用 20~30 倍柱体积的纯有机溶剂如乙腈等进行冲洗。每根色谱柱在运输过程中均会附有两个可拆卸的堵头。为了防止柱床干涸,请用堵头塞紧色谱柱的两端。

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